نحوه بهینه سازی تجزیه و تحلیل HPLC و بهبود کارآیی آزمایشگاهی

در آزمایشگاههای تحلیلی ،کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا (HPLC)یک روش اساسی برای جدا کردن ، شناسایی و کمیت ترکیبات است. با این حال ، دستیابی به نتایج سازگار و قابل اعتماد بیش از تجهیزات مناسب نیاز دارد - این امر نیاز داردبهینه سازیبشر در این مقاله به بررسی چگونگی ارتقاء خود می پردازیدتجزیه و تحلیل HPLCبرای به حداکثر رساندن کارآیی ، به حداقل رساندن خرابی و بهبود دقت.

چالش های مشترک در تجزیه و تحلیل HPLC و نحوه حل آنها

در حالی که HPLC یک ابزار تحلیلی قدرتمند است ، اما بدون چالش نیست. موضوعاتی مانندوضوح ضعیف ، سر و صدای پایه و نتایج متناقضمی تواند مانع از کارآیی آزمایشگاهی شود. در اینجا نحوه رسیدگی به این مشکلات رایج آورده شده است:

1. وضوح ضعیف

یکی از شایع ترین مشکلات در HPLC ، جدایی ضعیف بین قله ها است ، اغلب به دلیلانتخاب ستون نادرست یا نرخ جریان زیر حدبشر برای بهبود وضوح:

• A را انتخاب کنیدستون کروماتوگرافیبا مناسبفاز ثابت و اندازه ذراتبرای آنالیت های شما

• تنظیمسرعت جریان و شرایط شیببرای تقویت وضوح و جدایی اوج.

• استفاده کنیدکنترل دمابرای تثبیت زمان احتباس و بهبود تکرارپذیری.

2. رانش یا سر و صدا پایه

سر و صدای پایه می تواند در تشخیص اوج و دقت داده ها تداخل داشته باشد. این مسئله اغلب ناشی از:

•نوسانات دما- یک محیط آزمایشگاهی پایدار را حفظ کنید و در صورت لزوم از اجاق گاز ستون استفاده کنید.

•فاز متحرک آلوده-از حلالهای با خلوص بالا استفاده کنید و فاز تلفن همراه خود را قبل از استفاده فیلتر کنید.

•آلودگی سازها- به طور مرتب برای کاهش سر و صدای پس زمینه ، ردیاب ، پمپ و لوله را تمیز و حفظ کنید.

3. ادغام اوج متناقض

ادغام متناقض بر قابلیت اطمینان کمیت تأثیر می گذارد. برای حل این مسئله:

• اطمینان ازستون HPLC به درستی شرط شده استقبل از استفاده

• حفظسرعت جریان پایدارو از نوسانات فشار جلوگیری کنید.

• بهینه سازیتنظیمات نرم افزاری برای ادغام اوج، اطمینان از نتایج مداوم و قابل تکرار.

انتخاب ستون HPLC راست

انتخاب ستون صحیح HPLC استبرای دستیابی به جدایی بهینه بسیار مهم استبشر این عوامل را هنگام انتخاب ستون در نظر بگیرید:

•طول ستون: ستون های طولانی تر جدایی بهتری را فراهم می کنند اما زمان تجزیه و تحلیل را افزایش می دهند. طولی را انتخاب کنید که وضوح و سرعت را متعادل کند.

•قطر ستون: ستون های باریک وضوح بالاتری را ارائه می دهند اما به فشار بیشتری نیاز دارند. از سازگاری با سیستم HPLC خود اطمینان حاصل کنید.

•مرحله: فاز را با شیمی مناسب برای آنالیت های خود انتخاب کنید (به عنوان مثال ، C18 برای ترکیبات غیر قطبی ، فنیل برای ترکیبات معطر).

بهینه سازی مراحل موبایل و نرخ جریان

فاز تلفن همراه برای تجزیه و تحلیل موفقیت آمیز HPLC مهم است. در اینجا نحوه بهینه سازی آن آورده شده است:

•ترکیب حلال را تنظیم کنید: خوب تنظیم کنیدنسبت حلالبرای بهبود جدایی. استفاده کردنشستشوی شیببرای نمونه های پیچیده

•سطح pH کنترل: اطمینان حاصل کنیدpH فاز سیاربا نمونه و ستون سازگار است.

•سرعت جریان را بهینه کنید: نرخ جریان بالاتر زمان تجزیه و تحلیل را کاهش می دهد اما ممکن است وضوح را به خطر بیاندازد. سرعت و کارآیی تعادل بر اساس روش شما.

نگهداری و مراقبت های پیشگیرانه

تعمیر و نگهداری مناسب تضمین می شودعملکرد مداوم و طول عمر ابزار را گسترش می دهدبشر این بهترین شیوه ها را دنبال کنید:

•تمیز کردن روتین: مرتباً تمیز کنیدانژکتور ، ستون و ردیاببرای جلوگیری از آلودگی

•مواد مصرفی را جایگزین کنید: تغییرمهر و موم ، فیلتر و لولهدر صورت نیاز برای جلوگیری از نشت و نوسانات فشار.

•کالیبراسیون سیستم: به طور مرتب ردیاب ها و سایر مؤلفه های مهم را برای اطمینان از نتایج دقیق کالیبره کنید.

پایان

بهینه سازی تجزیه و تحلیل HPLC برای بهبود کارآیی آزمایشگاهی و اطمینان از نتایج با کیفیت بالا ضروری است. با پرداختن به موضوعات متداول مانندوضوح ضعیف ، سر و صدای پایه و ناسازگاری های ادغام اوج، و با انتخاب حقستون ها و مراحل موبایل، می توانید عملکرد تحلیلی خود را به میزان قابل توجهی افزایش دهید. منظمنگهداری و بهینه سازی روش دقیقسیستم HPLC خود را در اوج راندمان اجرا می کند ، به حداقل رساندن خرابی و اطمینان از نتایج دقیق و قابل تکرار.

برای راهنمایی متخصص دربهینه سازی HPLC، تماسکروما- ما در تهیه تخصص داریمراه حل های کروماتوگرافی سفارشیبرای کمک به آزمایشگاه خود در دستیابی به بالاترین استانداردهای عملکرد.